CRISPR基因敲入细胞株构建服务
孚博生物提供CRISPR/Cas9基因敲入服务。较早的基因敲入方式主要是通过随机整合或转座子系统整合到宿主基因组中，这种敲入方式随机性较强，很容易引起其它基因功能的丧失，同时插入的拷贝数和位置不固定，因此同一来源的细胞系中不同的细胞间表达差异比较明显，不利于控制基因的表达水平。孚博生物利用CRISPR/Cas9技术可以实现外源基因的定点敲入，使遗传背景更为简单，实验操作更加精准、高效。
CRISPR基因敲入技术原理
服务优势
l 高成功率，多组gRNA设计和验证
l 快速交付，实验进展定期汇报，2-3月交付基因敲入细胞单克隆
l 完整全套一站式服务，可提供其他分子、蛋白等相关服务
l 售后保障
项目服务流程
项目 | 详情 | 周期 | 价格 |
项目评估 | 与客户沟通项目信息 | 2-3月；具体项目有一定差别 | 具体请询价 |
细胞预实验 | Cas9导入细胞方法；药物浓度预实验等 |
靶点设计 | 一般在不同转录产物的共同外显子上设计3-6个靶点 |
载体构建和病毒包装 | 确定转染方案；选择合适的普通载体或病毒载体--普通Cas9载体、慢病毒Cas9载体和腺病毒Cas9载体 |
内源活性筛选 | 转染细胞或感染细胞，使用Puro或Blasticidin筛选，提取基因组DNA。使用T7E1酶验证打靶载体的活性。将有效的突变型PCR产物测序验证 |
Donor载体 | 根据筛选的gRNA靶点位置，构建Donor普通载体或腺病毒载体。共转染/感染 Cas9-gRNA和Donor |
单克隆筛选与扩大培养 | 无限稀释到每孔1个细胞的数量，每株细胞铺至少2个96孔板。细胞长好够，验证内源活性并送测 |
支原体单克隆质量检测 | 检测细胞质量确保无污染 |
交付单克隆及项目报告 | 交付详细项目报告 |
客户提供
目的基因序列号
特殊细胞，请提供细胞及培养流程等
实验案例
孚博生物追求专业化发展道路，始终秉持“质量第一，客户至上，开拓创新求发展”的运营方针，用我们的专业化服务为您创造更高的价值。
