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酵母双杂交服务
服务详情



酵母双杂交服务


孚博生物依赖专业酵母杂交技术团队,为您提供高质量一站式酵母单、双杂交文库构建及筛选服务,助力您的科研!


酵母杂交技术介绍


随着分子生物学研究尤其是人类基因组计划的迅速发展,为适应对众多基因或蛋白进行功能研究的发展趋势,已出现了很多新技术。其中酵母双杂交技术以其简便,灵敏,高效以及能反映不同蛋白质之间在活细胞内的相互作用等特点在基因功能的研究中得到了广泛的应用。
 

酵母双杂交系统的建立基于对真核生物调控转录起始过程的认识。酵母转录因子GAL4含两个结构域:DNA结合功能域和转录激活结构域,前者可识别DNA上的特异序列,并使转录激活结构域定位于所调节基因的上游,后者同转录复合体的其他成分作用,启动相应基因的转录。将编码DNA结合功能域的基因与已知诱饵蛋白质基因构建在同一个表达载体上,在酵母中表达两者的融合蛋白,将编码DNA转录激活域的基因和cDNA文库的基因构建在AD—LIBRARY表达载体上,同时将上述两种载体转化改造后的酵母。当两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时,功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因,从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性菌落。将阳性反应的酵母菌株中的AD—LIBRARY载体提取分离出来,从而对载体中插入的文库基因进行测序和分析工作。


酵母双杂交技术原理



酵母单杂交技术原理


基于酵母双杂交技术平台的特点,它已经被应用在许多研究工作中,包括:用已知功能的蛋白基因筛选双杂交cDNA文库,以研究蛋白质之间相互作用的传递途径;分析新基因的生物学功能。即以功能未知的新基因去筛选文库。然后根据钓到的已知基因的功能推测该新基因的功能;筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互作用的影响;检验一对功能已知蛋白间的相互作用;在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用等。



酵母双杂交系统与其他实验手段相比,也有独特的优势:

l  融合蛋白之间的相互作用是在真核酵母细胞内进行,蛋白质保持天然的折叠状态,更接近体内真实水平。

l  双杂交系统的林敏度非常高,蛋白之间结合常数低至1mmol/l时都可以被侦测。

l  在筛选cDNA文库是,双杂交系统能简捷的得到编码相互作用蛋白的基因序列,只需构建质粒而不必准备抗体或者蛋白,省略了其他体外检测方法的繁琐步骤。



Clonetech&Invitrogen杂交体系比较



Clontech体系

Invitrogen体系

样本量

1 μg  total RNA(OD 260/280为1.8-2.2)
  样本起始量低

500 μg  total RNA (OD 260/280为1.8-2.2)
 样本起始量高

二链合成

SMART技术

通过PCR扩增,在后续可加一步均一化,

以降低冗余序列。

缺点:如果物种GC含量过高(如水稻),

可能会影响二链PCR扩增效率从而影响库的质量

mRNA反转录

可获得完整的基因信息,避免冗余

文库构建

文库载体:pGADT7-Rec

转化Y187酵母

同源重组方法,一步完成

初级文库载体:pDONR™222 vector

次级文库载体:pGADT7-  DEST

转化DH10B菌株

Gateway方法,需进行两次重组



孚博酵母杂交技术服务内容


服务项目

技术方法

交付

周期

价格

酵母单杂交文库构建技术服务

l   Clontech

l   Invitrogen-Gateway

l   同源重组法

l   Split-ubiquitin泛素系统-跨膜蛋白相互作用

l  文库库容量:大于1*10^7CFU。

l  平均插入片段:大于1.2Kbp。

l  阳性率:大于95%。

4-6

询价

酵母单杂交文库筛选技术服务

l   提供详细的、完整的实验报告,清晰的实验图片,筛选结果的测序结果,质粒等

10-15

核蛋白体系酵母双杂交文库构建技术服务

l  文库库容量:大于1*10^7CFU。

l  平均插入片段:大于1.2Kbp。

l  阳性率:大于95%。

4-6

膜蛋白体系酵母双杂交文库构建技术服务

4-6

核蛋白体系酵母双杂交文库筛选技术服务

l   提供详细的、完整的实验报告,清晰的实验图片,筛选结果的测序结果,质粒等

10-16

膜蛋白体系酵母双杂交文库筛选技术服务

10-16



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