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SILAC定量蛋白质组分析
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SILAC定量蛋白质组分析

SILAC 即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture,SILAC),其实验原理是在细胞培养基中加入轻、中或重型稳定同位素标记的必需氨基酸(赖氨酸和精氨酸),通过细胞的正常代谢,经5-6个倍增周期后,稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中,使新合成的蛋白带上稳定同位素标签。等量混合各类型蛋白质,酶解后进行质谱分析。通过比较一级质谱图中同位素峰型的面积大小进行相对定量,同时二级谱图对肽段进行序列测定从而进行蛋白鉴定。

由于SILAC标记技术是体内标记技术,几乎不影响细胞的功能,同时灵敏度高,被广泛用于比较蛋白质组学研究中,如哺乳动物信号转导、蛋白互作、蛋白质翻译后修饰的动态变化等领域。


孚博生物为您提供SILAC定量蛋白质组技术服务,可用于多个样品或同一样品不同条件下全细胞蛋白或亚细胞蛋白的差异比较,直接判定蛋白质表达水平差异、区分特异性和非特异性相互作用等。




技术特点


l  高效性:SILAC是体内标记技术,标记效率可高达100%;

l  定量精确,线性范围广,降低由于样品制备、实验操作和仪器设备造成的实验误差,定量重复性好;

l  体内代谢标记与SDS-PAGE或色谱分离技术相结合,兼容疏水性蛋白和偏碱性蛋白,不受蛋白性质限制;

l  由于该技术属于体内标记,标记效果稳定,其标记效率不受裂解液的影响,不仅适合于进行全细胞蛋白的分析,还适合于膜蛋白的鉴定和定量;

l  与化学标记相比,SILAC方法蛋白需要量明显减少,通常每个样品只需要几十微克的蛋白量;

l  活体标记,更接近样品真实状态;

l  相容性:可以对多种在DMEM或RPMI 1640培养基中能够培养的细胞或细菌中表达的蛋白进行标记。

孚博服务流程及内容


l  接受订单及样品

l  细胞同位素标记;

l  样本制备与定量

l  SDS-PAGE分离;

l  胰酶酶切、LC-MS/MS分析

l  蛋白质定性及定量分析;

l  差异蛋白的生物信息学分析

l  实验报告整理。


送样须知

l  能标记活的可传代细胞、细菌等材料,不能标记组织、体液等样本,请联系我们详询。


最终交付

l  蛋白定鉴定和SILAC定性、定量分析结果;  

l  SILAC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。

l  其他客户需求分析数据


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