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AAiTRAQ定量蛋白质组分析
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iTRAQ定量蛋白质组分析


iTRAQ和TMT是目前运用最广泛的两种标记定量蛋白质组技术,分别通过与氨基酸末端氨基以及赖氨酸残基的游离氨基结合,实现对多肽的标记,并通过不同分子量的试剂对不同来源样品进行标记的方式实现不同样品间蛋白质组比较的目标。

以iTRAQ试剂为例,该试剂结构由指示基团、中性平衡基团和反应基团三部分组成。不同指示基团及其相对应平衡基团的质量和都相同,而反应基团能与赖氨酸ε氨基和所有肽链的氨基末端连接,可标记所有氨基酸。不同标记试剂与来源于不同样品胰酶消化后的肽段结合,经过色谱分离,并通过一级质谱和二级质谱。平衡基团在二级质谱时发生中性丢失,而报告基团在二级质谱低质量区域产生多个报告离子,其信号强度分别代表该标记样品的表达量,根据报告离子的峰面积计算同一蛋白质同一肽段在不同样品间的比值,从而实现蛋白的相对和绝对定量。


技术优势


iTRAQ可于一次实验中同时标记48个的样品,操作简单快速,减少多次质谱检测中产生的系统误差,适用于对多个样品进行高通量的检测,实验设计更加灵活;

iTRAQ是在肽段水平上进行的体外标记,几乎适用于所有类型的生物样本;

重现性好、灵敏度高、定性与定量可同时进行;

检测限低,可检测出低丰度蛋白;

报告离子的相对分子质量较低,定量分析结果更加灵敏可靠;

在样本中加入iTRAQ试剂标记的已知量的标准蛋白,可实现绝对定量研究。



孚博生物为您提供iTRAD/TMT标记定量蛋白组学分析服务。

服务流程


l 客户沟通、方案咨询:为您设计合理的iTRAQ实验方案

l 寄送样品

l 待定量样品经不同条件处理完毕后,经细胞裂解抽提蛋白;

l 用预估每个样品中的蛋白浓度;

l 蛋白经蛋白酶,如胰蛋白酶酶切得到肽段;

l 各组肽段用不同的iTRAQ/TMT试剂标记并混合;

l 混合后的样品用LC-MS/MS做定性定量分析。

l 质谱原始数据分析

l 提交实验数据及报告,包括完整的分析结果、实验报告

服务周期

5-7




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