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蛋白质相互作用分析服务
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蛋白质相互作用分析服务

蛋白质是细胞的功能分子,通过实时、动态、交互式的蛋白质相互作用网络(Protein-Protein Interaction network, PPIs),以实现细胞对外界不同刺激的应答北京孚博生物可根据您的需求提供不同方案的蛋白质互作分析技术服务。


免疫共沉淀(CO-IP)


免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原间的专一性作用为基础的、研究蛋白质相互作用的经典方法。 基本原理:用温和的裂解方式裂解细胞,目的是保留住细胞内的蛋白结合情况,向裂解液中加入“诱饵蛋白”特异性的抗体,抗体、诱饵蛋白和结合蛋白通过免疫反应形成复合物,洗脱收集复合物,SDS-PAGE电泳,western blot或质谱可验证或鉴定与诱饵蛋白互作的蛋白质。


Pull down

Pull-down又叫做蛋白质体外结合实验,是在外源条件下检测蛋白质间相互作用的方法。基本原理:将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,充当 “诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的结合蛋白,洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,验证两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白;“诱饵蛋白”一般采用原核表达(也可以通过其他方式)获得,而“捕获蛋白”可以是细胞裂解物、纯化蛋白或表达系统获得的蛋白。


SILAC

在CO-IP基础上引入SILAC同位素标记来筛选互作蛋白的方法。基本原理:用轻、重链同位素培养基分别培养对照组和实验组细胞,传6代以后,细胞蛋白质被同位素完全标记上;在此基础上收集等量细胞,进行Co-IP实验,分离免疫复合物;之后,利用LC-MS/MS来定性和定量复合物中的蛋白:当实验组与对照组中某个蛋白质的含量达到统计学差异时,判定这个蛋白与诱饵蛋白具有相互作用。

SILAC技术特点:1.特异性强,结果可信,假阳性极低;2.高通量,能一次性检测到多种互作蛋白 3.能直接检测出与bait蛋白互作的其它蛋白的相对含量

孚博生物根据您的需求,制定不同的技术分析方案,助力您的蛋白互作分析科研。

服务详情及价格周期,请详询。




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