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无细胞蛋白表达系统
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无细胞蛋白表达系统




无细胞表达系统是一种区别于传统蛋白表达系统的新型蛋白制备系统,以外源DNAmRNA为模板,利用细胞抽提物中的细胞器,蛋白折叠因子及其他相关酶系,通过添加氨基酸和T7聚合酶和能量物质来实现蛋白表达的体外系统。主要有细菌无细胞蛋白表达系统和哺乳动物无细胞表达系统。


孚博生物团队优化了数个无细胞的重组蛋白快速合成表达系统,利用了细菌、兔网织红细胞、CHO及人源裂解物等多种系统。细菌系统非常适于进行高得率蛋白制备,而哺乳动物系统则更适用于制备需要天然翻译后修饰的蛋白质。人及CHO细胞系所制得的蛋白质通常都具有完整长度和功能活性,且得率相比使用兔网织红细胞裂解物时更高。

各中无细胞表达系统比较


大肠杆菌

兔网织红细胞

HeLa

CHO

得率

中高

蛋白修饰

有限糖基化

糖基化及磷酸化

糖基化及磷酸化

推荐用于高MW蛋白质表达

制备功能蛋白质

可能

可能

评价

稳定的系统

灵活的系统

每次反应蛋白得率更高

每制得1毫克蛋白成本最经济

无细胞表达系统的优势

1.  更快得到数据:仅需1小时即可获得功能蛋白

2.  节省时间:表达蛋白可以直接用于后续实验,不需要额外纯化。

3.  更适用于激酶等毒性蛋白的表达、也可使用经过修饰的tRNA来进行标记,在某特定位点掺入非天然的氨基酸。

4.  表达的蛋白可用于蛋白-蛋白互作实验;蛋白-核酸互作实验,蛋白修饰等多种特征分析。


孚博生物大肠杆菌无细胞表达系统服务流程

1.  根据客户的要求选择合适的表达系统

2.  模板的设计与制备

3.  蛋白表达

4.  样品分析(蛋白-蛋白相互作用、蛋白-核酸相互作用、蛋白修饰)

5.  提交报告




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