MHC 四聚体 (MHC-peptide Tetramers)

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MHC 四聚体检测技术于 1996 年由美国斯坦福大学医学院的 John D. Altman 博士所开发，它在单细胞水平上标记目标 T 细胞，并通过流式细胞术对细胞进行分析，从而成为一种快速、简便的检测抗原特异性 T 细胞（antigen-specific T cells）的定性及定量分析方法。

其中，MHC分子在免疫应答过程中发挥着抗原识别的作用，主要功能是将抗原呈递给T细胞，以区分自身（我们的细胞和组织）和非己（入侵者或修饰的自身）。以人类为例，如下图所示，MHC具有三个区域：MHC-I，MHC-II和MHC-III，通常，MHC指的是MHC-I或MHC-II分子，结构如下图，包括 MHC- I区中的经典HLA抗原HLA-A，-B和-C，非经典HLA抗原HLA-E，-G和-F，以及MHC-II区中的HLA-DR，-DQ和-DP等。

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MHC 四聚体检测抗原特异性T细胞原理

细胞在肿瘤、病毒、细菌、寄生虫、移植组织、过敏原、甚至自身抗原的适应性免疫应答中都发挥着重要的调节作用。大部分 T 淋巴细胞在其细胞表面表达单一的、高度特异性的抗原受体（TCR），通过抗原呈递过程与 MHC-抗原肽复合物相结合并识别其中特异的抗原肽，启动获得性/特异性免疫应答机制，比如 T 细胞介导的细胞免疫和 B 细胞介导的体液免疫，如下图所示。由于 TCR 与 MHC-抗原肽复合物之间的亲和力低，半衰期短，相互结合后容易快速脱落。而MHC-抗原肽复合物四聚体（简称：MHC 四聚体）技术由 4 个MHC-抗原肽单体分子及荧光染料组成的复合物，它以带有信号标记的链霉亲合素为基础，交联四个MHC 分子单体，形成 MHC 四聚体；一个 MHC 四聚体分子可与同一T细胞表面的3-4 个 TCR 相识别并结合，从而大大增强了 MHC-抗原肽复合物与 TCR 之间的结合力和检测特异性，并可通过流式细胞术成功实现对抗原特异性的 T 细胞的离体分析，因此目前深受研究者喜爱。

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MHC四聚体制备

抗原多肽片段与MHC单体在结合位点结合并经过折叠后形成可溶性的 MHC多肽复合物单体，随后在生物素化和纯化后通过链霉亲和素缀合的荧光染料将单体标记，并且转化为四聚体。

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MHC四聚体应用

在肿瘤、感染、自身免疫性疾病等研究领域被越来越多地运用于：

Ø 细胞分选——特异性 T 细胞高效分选；

Ø 抗原表位研究——抗原表位短肽亲和力筛选；

Ø 病毒逃逸研究——病毒逃避免疫机制研究；

Ø 细胞治疗研究——T 细胞表面受体 TCR 亲和力研究；

Ø 抗体筛选研究——T-Cell Receptor-Like Antibodies筛选研究；

Ø MHC 免疫功能研究——利用混合抗原表位片段鉴定 MHC 免疫功能；

MHC四聚体优势

与其他应用于 T 细胞检测的方法如胞内细胞因子染色法（ICS）、酶联免疫斑点检测法（ELISPOT）等相比，MHC 四聚体技术具有：

Ø 高灵敏度：可检测血液中低丰度（≤1%）的抗原特异性 T 细胞；

Ø 高特异性：极大提高了 TCR 与 MHC-抗原多肽复合物结合的特异性；

Ø 稳定性好：检测结果一致性好，可重复性高；

Ø 多样化/个性化：可定制合成特异的抗原多肽片段，组合成各种 T 细胞选择性 MHC 四聚体；

Ø 定性/定量分析：可结合流式细胞术实现对抗原特异性 T 细胞群的定性/定量分析；

孚博提供的即用型MHC四聚体

Ø 荧光标记选择灵活： PE， APC， FITC、BV421等

Ø 种属涵盖范围广泛：人、鼠、大猩猩、猕猴、猪，鸡等；

Ø 四聚体类别多样：人MHC- I类HLA-A，-B，-C， -E，-G和-F，以及MHC-II类中的HLA-DR、；小鼠、猪、大猩猩等多种物种的MHC- I类和MHC-II的四聚体；同时能为您提供四聚体阴性对照，详情请具体咨询；

一类四聚体如下

l HLA-A * 01：01，HLA-A * 02：01，HLA-A * 02：03，HLA-A* 03：01，HLA-A * 11：01，HLA-A * 24：02，HLA- A * 24：07，HLA-A* 25：01，HLA-A * 29：02，HLA-A * 30：02，HLA-A * 36：01，HLA-A* 68：01，HLA-A * 68:02

l HLA-B * 07：02，HLA-B * 08：01，HLA-B * 14：01，HLA-B* 15：01，HLA-B * 15：02，HLA-B * 15：09，HLA- B * 18：01，HLA-B* 35：08，HLA-B * 39：06，HLA-B * 41：01，HLA-B * 44：02，HLA-B* 46：01，HLA-B * 55：01，HLA-B * 57：02

l HLA-C * 03：04，HLA-C * 05：01，HLA-C * 06：02，HLA-C* 07：02

l H-2Kb、H-2Db、H-2Ld、H-2Kd、以及H-2Dd；

l Mamu-A*01、Mamu-A*02

二类四聚体如下

l Class ll: IA：H-2Iab、H-2IAd；

l Class lI: HLA DR：A1*01:01/B1*01:01、A1*01:01/B1*15:01、A1*01:01/B1*03:01、A1*01:01/B1*04:01、A1*01:01/B1*11:01、A1*01:01/B1*13:01、A1*01:01/B1*07:01、A1*01:01/B1*07:01、A1*01:01/B1*01:02、A1*01:01/B1*04:02、A1*01:01/B1*04:04、A1*01:01/B1*04:05、A1*01:01/B1*04:07、A1*01:01/B1*04:08、A1*01:01/B1*08:04、A1*01:01/B1*09:01、A1*01:01/B1*10:01、A1*01:01/B1*11:02、A1*01:01/B1*11:03、

A1*01:01/B1*11:04、A1*01:01/B1*15:02、A1*01:01/B1*15:03、A1*01:01/B1*16:01、A1*01:01/B1*16:02、A1*01:01/B3*02:02、A1*01:01/B3*03:01、A1*01:01/B5*01:01

l Class lI: HLA DQ：A1*01:01/B1*05:01、A1*05:01/B1*03:01、A1*01:02/B1*05:02、A1*01:02/B1*06:02、A1*03:01/B1*03:02、A1*01:02/B1*06:04、A1*05:01/B1*02:01、A1*02:01/B1*02:02、A1*03:01/B1*03:01、A1*02:01/B1*03:03、A1*03:03/B1*03:03

l Class lI: HLA DP：A1*01:03/B1*01:01、A1*01:03/B1*02:01、A1*01:03/B1*03:01、A1*01:03/B1*04:01、A1*01:03/B1*04:02、A1*01:03/B1*05:01、A1*02:01/B1*01:01、A1*02:01/B1*02:01、A1*02:01/B1*03:01、A1*02:01/B1*04:01、A1*02:01/B1*04:02、A1*02:01/B1*05:01、A1*02:01/B1*06:01、A1*02:01/B1*09:01、A1*02:01/B1*11:01、A1*02:01/B1*13:01、A1*02:01/B1*14:01、A1*02:01/B1*15:01、A1*02:01/B1* 17:01

Ø 提供空载四聚体：能够自己连接肽段和标记染料；

不同方式标记的H-2Kb、HLA-A*02:01、HLA-B*07:02、HLA-A*11:01、HLA-A*02:01、HLA-A*24:02、HLA-A*03:01、mCD1d、hCD1d等多种等位基因的空载四聚体，添加多肽段即可完成四聚体的制备，不仅四聚体更加稳定，而且能够帮助客户更加灵活的制备四聚体；

ØMHC生物素化的单体；

多种等位基因的生物素化单体可供选择

l HLA-C * 03：04，HLA-C * 05：01，HLA-C * 06：02，HLA-C* 07：02

l H-2Kd、H-2Kb、H-2Db、H-2Dd、以及mCD1d、hCD1d；

Ø 四聚体多肽置换试剂盒

能够实现HLA-A*02:01、HLA-A*24：02以及H-2Kb三种类型等位基因，PE、APC、BV421三种荧光标记方式的四聚体的肽段置换，快速便捷的完成四聚体的制备。

其他四聚体（人和鼠）

Ø针对自然杀伤T细胞（NKT cells）

CD1d Tetramers---预装载配体α-半乳糖苷神经酰胺(α-Galcer)/空载；

---阴性对照；

如PE-CD1d Tetramer–Human-α-GalCer

APC-CD1aTetramer-EMPTY